[求助]细胞培养，离心问题。

hyuu (2012-3-20 11:54:31)

细胞一定要用水平离心机离心，若是用＜1.5ml的EP管离心就没办法。

hyuu (2012-3-20 11:55:18)

更正：是水平式离心机。

minran_1980 (2012-3-20 11:55:35)

不是水平的，离心管在里面大概与地面45度角度吧。转速是1000rpm时间是5min。离心管是玻璃的，长约9cm。直径约1.3cm。

zhenxin (2012-3-20 11:56:03)

你没配平吧，要尽可能地配平。我曾经就是因为没配平所以离在管壁上，后来注意到这个问题就好了。

minran_1980 (2012-3-20 11:56:47)

这个离心机可以自动配平的，你只要差不多就可以了。下面有我使用的离心机的图。15730381.jpg

okhaha (2012-3-20 11:57:08)

离心细胞用普通低速离心机，用标配的角转子(也就是那个45度的)就可以了，不用水平的。

这种离心机不完全配平也是可以的。只是，用的时间长了(大概4年吧)之后，可能会出现加速到1000转以后出现故障自动停转，需要重复“打开盖子，合上盖子，启动，停止”的痛苦过程。

narutao 遇到的这种问题，通常是细胞长得过密，或(和)消化时间过长，导致吹打后细胞状态稍差有关。用滴管吸出部分上清，然后重新吹打均匀，再次离心，可以让情况好转。然后用滴管吸出上清，传代。不过，细胞浓度稍微大一点，过几个小时后换一次液，细胞会比较好。

leifengta (2012-3-20 11:57:39)

请教大虾们一个问题：

本人的细胞在离心的时候最近出现了问题，一般离心后我们的细胞会沉积在管底，现在我的细胞离心后，沉积在管壁，形成一条线直到离心管底，请问这是为什么？什么原因造成的？以前都还好，现在才出现的。因为沉积在管壁在去上清的时候很容易把细胞扔掉的。所以希望哪位大虾可以指导一下。细胞是Hela和3T3细胞。

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那啥，应该是你最近使用的胰酶比以前更威猛了，造成部分核酸、粘多糖等增多，粘附住部分细胞形成拖尾。

记住一定要用含血清的培养基终止胰酶消化，不同批次的胰酶，要用1个自己实验室的标准细胞校正1下消化时间。

minran_1980 (2012-3-20 11:58:14)

离心细胞用普通低速离心机，用标配的角转子(也就是那个45度的)就可以了，不用水平的。

这种离心机不完全配平也是可以的。只是，用的时间长了(大概4年吧)之后，可能会出现加速到1000转以后出现故障自动停转，需要重复“打开盖子，合上盖子，启动，停止”的痛苦过程。

narutao 遇到的这种问题，通常是细胞长得过密，或(和)消化时间过长，导致吹打后细胞状态稍差有关。用滴管吸出部分上清，然后重新吹打均匀，再次离心，可以让情况好转。然后用滴管吸出上清，传代。不过，细胞浓度稍微大一点，过几个小时后换一次液，细胞会比较好。

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细胞多了就无所谓了，反正管底还有，有时候我们的细胞比较少，只看见管壁贴了一条。吸上清的时候很容易把管壁的细胞吸掉，所以最后都没有细胞了。很麻烦？

minran_1980 (2012-3-20 11:58:34)

那啥，应该是你最近使用的胰酶比以前更威猛了，造成部分核酸、粘多糖等增多，粘附住部分细胞形成拖尾。

记住一定要用含血清的培养基终止胰酶消化，不同批次的胰酶，要用1个自己实验室的标准细胞校正1下消化时间。

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按照你的意思是贴在管壁的不是细胞，是细胞碎片核酸等。。。？？？

leifengta (2012-3-20 11:59:02)

按照你的意思是贴在管壁的不是细胞，是细胞碎片核酸等。。。？？？

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是包含细胞的，因为这种离心方式是不能够分开细胞、细胞碎片、核酸.......。

minran_1980 (2012-3-20 11:59:28)

离心机的问题我们可以排除，因为我们离心3T3细胞都还好，主要是Hela细胞，请问有没有其他养Hela细胞的也出现这种问题啊